鸟苷酸的生产方法有酶水解ＲＮＡ法、菌体自溶法、发酵法和化学合成法４种方法。鸟苷酸生产工艺目前运用最广泛的是发酵转化法，利用一定微生物，以Chemicalbook葡萄糖作为碳源生产鸟苷，再利用生物或化学方法将其转化为鸟苷酸，如鸟苷磷酸化得鸟苷酸，且工业化生产鸟苷酸的方法就是采用鸟苷发酵的二步生产法。

化学合成法化学合成法通常是用焦磷酸或者磷酸的活性衍生物对核苷进行磷酸→酯化反应的方法。因为需要大量有机溶剂,存在环境污染及原料来源等问题，化学合成法在生产中也极少使用。发酵法发酵法生产鸟苷酸可分为2种方法：直接发酵法和发酵转化法。直接发酵法利用一定数量微生物，以葡萄糖为碳源进行发酵得到鸟苷酸，Chemicalbook但此方法得到的鸟苷酸产量低，不能达到工业化要求。目前，运用最广泛的方法是发酵转化法，利用一定微生物，以多糖或葡萄糖作为碳源生产鸟苷，再利用生物或化学方法将其转化为鸟苷酸。一般都是先对枯草芽孢杆菌进行斜面培养、种子培养以及发酵培养获得鸟苷，再利用溶液与吡啶溶液制得鸟苷酸，反应式如图所示。