D-核糖与经缩合、催化氢化得核糖胺，后者与重氮盐偶合、巴比妥酸环合即得本品。生产方法维生素B2自然存在于动物的肝、肾以及肉类和乳类等食物中，工业上生产方法有发酵法和化学合成法。发酵法以葡萄糖、玉米浆、无机盐等为培养基，用特种活性菌阿氏假囊酵母(Eremotheciumashbyii)于28℃深Chemicalbook层发酵培养9d，发酵液中约含6～8g/L的核黄素产品。提取收率为60%～70%。合成法较好的合成法是先在Ph=4和28～30℃下由与D-核糖缩合，然后经镍催化加氢还原得核糖胺，后与苯胺重氮盐在16～26℃下偶合，再用低亚硫酸钠(保险粉)还原，最后在醋酸中与巴比妥酸(四氧嘧啶)环合成维生素B2。

黄至橙黄色结晶性粉末，微臭，味微苦。熔点280℃(分解)。易溶于碱性溶液和氯化钠溶液，微溶于水，略溶于乙醇，不溶于乙醚和氯仿。水溶液呈黄绿色，饱和水溶液呈中性。耐热性Chemicalbook、耐酸性较好，在碱性溶液中或受紫外线照射则易受破坏，对还原剂也不稳定。大白鼠腹腔注射LD50560mg/kg，ADI0～0.5mg/kg(FAO/WHO，1994)。