系统适用性试验用色谱仪分离相同体积(可达25μl)的标准液的5个进样，并按检测步骤测定峰响应值。按公式100×(标准偏差/平均峰响应值)计算峰响应值的相对标准偏差，不得超过2%。用相同方式注射25μ1体积的系统适用性溶液。按色谱仪通用试验用于R的公式计算甲酰四氢叶酸钙和叶酸之间的分辨率系数，不得小于3.6(用特殊的柱时，减少流动相中的甲醇量可提高分辨率)。测定步骤用适当的进样阀或高压微型注射器，将相等体积(25#1以下)的试样液和标准液导入色谱仪，测定两溶液所得主峰的响应值。按下式计算试样中的叶酸(C19H19N7O6)含量(mg)。叶酸含量/mg=Vc×(Pu/Ps)式中V——试样液体积，ml；c——标准溶液中药典级标准叶酸的浓度，mg/ml；Pu和Ps——分别为试样液和标准Chemicalbook液的主峰响应值。毒性LD50500mg/kg(大鼠，注射)。可安全用于食品(FDA，§172．345，2000)使用限量GB14880-94；婴幼儿配方食品380～700μg/kg；孕妇、授乳妇专用食品2000～4000μg/kg。GB2760—2002：孕妇、母乳专用食品0.002～O．0075g／kg；固体饮料0.6～1.35mg／kg；免淘洗大米、面粉1000～3000μg/kg；孕妇及乳母专用奶粉740μg/100g(标签应标明使用量为54g/d)；含乳固体饮料0.23～0.38mg/100g；即食早餐谷类食品1000～2500μg/kg；果冻50～100μg/kg；可可粉及其他口味营养型固体饮料，3000～6000μg/kg(相应营养型乳饮料按稀释倍数降低使用量)。